56800字硕士毕业论文医学毕业论文范文:比较两种剂型亚甲蓝光敏剂介导的光能疗法对粪肠球菌污染的抗菌效果
论文类型：硕士毕业论文
论文字数：56800字
论点：光敏剂,剂型,抗菌
论文概述：
比较两种剂型亚甲基蓝光敏剂介导的光动力疗法对粪肠球菌感染的抗菌效应，PDT 抗菌作用越来越受到重视，本研究以水剂型 MB 和混合剂型 MB 为光敏剂，不仅体外观察其对 hPDLFs 的毒性作用，还
论文正文：
前言
随着牙髓治疗理念和技术的发展，根管治疗的成功率在过去有了显著提高，但仍有局部治疗失败的临床病例[1]。根管治疗失败的原因有很多，其中细菌污染是主要因素[2]。然而，粪肠球菌目前被认为是导致根管治疗失败的重要病原菌之一，[3]。作为一种在再处理根管中检出率高的病原菌，粪肠球菌不仅具有侵入牙本质小管的能力，[4]，而且可以生活在营养物质缺乏、高碱性和抗菌药物存在并导致再污染的恶劣环境中，[5-7]。如何有效清除根管内粪大肠杆菌污染已成为临床治疗胜利的关键。机械准备结合化学消毒是根管治疗的重要环节。该方法能有效去除根管中的大部分污染物质，对控制根管污染具有重要作用[8]。受根管解剖特征的影响，其在对抗隐藏部位(如深牙本质小管、侧分支根管、副根管等)的细菌污染方面仍有一定的局限性。)。
次氯酸钠溶液和氢氧化钙糊剂是临床常用的根管消毒药物。研究证明，在一定范围内，氯化钠溶液的抗菌效果随着药物浓度的增加而逐渐增加[9]，但其细胞毒性也随着药物浓度的增加而增加[10]，氯化钠溶液的表面张力限制了药物在牙根管系统狭窄部位，特别是牙本质小管中的扩散和清洁能力。此外，在体外和体内研究中，粪肠球菌对常用的根管消毒药物氢氧化钙具有很强的耐受性。即使药物的作用时间延长，也很难完全清除牙本质小管中的感染性物质，[12]。正是因为粪肠球菌对常规的机械制剂和化学消毒药物不敏感，所以剩余的细菌可以在根管中长时间存活，并在条件允许时在根管中形成再感染。临床上，它通常表现为难治性根尖周炎，如多次根管治疗后仍难以控制的再感染和持续的根尖周炎[13]。因此，探索一种安全有效的辅助根管消毒新方法，对提高临床难治性根尖周炎的成功率和预后具有重要意义。PDT作为目前世界上发展起来的一门跨学科学科，其抗菌感染的报道起源于上世纪初的[14]，但由于上世纪中叶抗生素的发现，它逐渐被人们遗忘。近年来，抗生素的广泛使用导致了耐药菌的广泛流行和一些多药耐药菌的出现。
因此，迫切需要找到新的抗感染战略。PDT因其高效、安全、毒副作用小和可重复使用的优点而在许多抗感染策略中脱颖而出，[15]。随着越来越多光敏剂的发展和实验条件的改善，光动力疗法在口腔医学研究领域也取得了很大进展，显示出广阔的应用前景。光动力疗法的抗菌机制是光敏剂在光源的激活下与氧分子反应生成活性氧物种(ROS)，活性氧物种作用于靶细胞，从而导致细菌裂解和死亡[6]。其基本元素主要由光源、光敏剂和氧气组成，其中光敏剂是光动力疗法的核心物质。
光动力疗法的蓬勃发展必将引发光动力疗法的关键组成部分光敏剂的研发热潮。近年来，随着科学的发展，光敏剂的开发和合成经历了几代改革。以血卟啉为代表的第一代光敏剂因其最大吸收波长不在对人体组织具有较好透射率的红光区、药效不理想、皮肤光毒性大等缺陷，在临床应用中受到限制。第二代光敏剂是在20世纪80年代以后发展起来的。它们的组成和结构很清楚。与第一代光敏剂相比，它们的光敏性、吸收光谱和组织选择性大大提高了[19]。第二代光敏剂部分克服了第一代光敏剂的缺点，即组成复杂，对组织选择性和光动力损伤强度的稳定性差，[20]。它的主要优点是光敏周期短，光波波长长，从而增加作用深度，产生更多的单线态氧，并对靶细胞更有选择性[21]。
目前，当PDT用于对抗口腔微生物感染时，选择了一种以上以O(甲苯胺蓝，TBO)或亚甲蓝，MB)为代表的第二代光敏剂。两者都属于吩噻嗪碱性染料，与细胞核中的脱氧核糖核酸和细胞质中的核糖核酸有很强的亲和力，[22]。研究发现，细菌、酵母和原生动物等病原体易受吩噻嗪染料的影响，因此，这些染料可用于光动力抗微生物疗法[23]。目前，TBO介导的血小板减少症已开始进入体内研究阶段，并取得了良好的治疗效果，[24-26]。然而，关于甲基溴的报道仍然主要局限于体外探索阶段。
事实上，甲基溴在医学领域有着广泛的研究和悠久的历史。早在20世纪30年代，就有关于甲基溴对抗噬菌体和病毒感染的报道，[27]。甲基溴不仅具有治疗疾病的功能，而且具有疾病诊断的价值。克里格等人[28]认为高浓度甲基溴可用于诊断膀胱癌，而不会引起宿主细胞的毒性反应。甲基溴的高诊断和治疗价值使其受到研究人员的欢迎，尤其是口腔研究人员。甲基溴作为一种亲水光敏剂，已被证明对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效，[29]。然而，现有的体外研究表明，由血小板介导的血小板减少症对根管感染菌有显著的疗效，但仍不能达到完全灭菌的效果。事实上，光敏剂类型的选择对根管消毒效果至关重要。理想的光敏剂需要低的表面张力，可以深入牙本质小管，仅在暴露于光下时显示局部毒性，并且对杀死微生物具有高选择性[30]。甲基溴物理性能的一个重要研究内容是它在水溶液中的聚合状态[31]。
当水剂型甲基溴与细菌相互作用时，容易在细菌表面聚集产生二聚体，二聚体的形成直接影响活性氧的生成，从而降低甲基溴的光敏效应。为此，学者们开始改进其剂型，形成一种光敏作用更强、更稳定的混合剂型MB。剂型中含有的有机成分(甘油、酒精)可以防止光敏剂聚合，因此它可以直接作用于目标细菌[32]的脱氧核糖核酸。此外，混合剂型甲基溴在牙本质小管中的渗透范围更深，因此光敏作用也增强。
目前，国内还没有关于甲基溴水溶液和混合甲基溴介导的磷酸二铵抗根管粪肠球菌感染的相关报道。从理论上讲，混合剂型甲基溴的抗菌效果优于水剂型甲基溴，因为它改善了光物理性质。然而，事实上，当两种不同的剂型用于根管消毒时，哪一种在抗菌效果上优于另一种仍然是不确定的。因此，有必要通过一系列的实验进行比较研究。考虑到光动力疗法在进入临床应用前必须首先满足两个方面，即不仅要有高效的抗菌和抑菌效果，还要有良好的生物安全性。
因此，本研究选择氟氯烃作为毒性检测细胞。首次通过体外实验观察了两种剂型甲基溴介导的血小板衍生化治疗对人乳头瘤病毒的毒性，并对其在根管消毒中的生物安全性进行了研究。然后用菌落计数法检测光合细菌对浮游粪肠球菌的抗菌作用，旨在探索细菌对光合细菌的敏感性，为以后根管感染模型中细菌生物膜的研究奠定实验基础，并提供相应的数据参考。同时，在研究甲基溴介导的光动力疗法对根管粪肠球菌生物膜的抗菌作用之前，还观察和比较了不同光照方式对光动力疗法的影响，进一步分析了影响光动力疗法抗菌效果的相关因素，为以后的实验奠定了技术基础和理论基础。
目录前言
10
实验1，亚甲蓝光动力疗法对人牙周膜成纤维细胞两种剂型的体外毒性研究13
实验2，亚甲蓝光动力疗法对粪肠球菌两种剂型的体外抗菌研究同时，本研究还观察并比较了两种不同剂型的甲基溴介导的光动力疗法和不同光照方式介导的光动力疗法的抗菌效果，从而分析了影响光动力疗法疗效的相关因素。结果如下:
1。当浓度≤ 25 μmol/L时，甲基溴介导的光动力疗法对体外培养的人乳头瘤病毒的毒性较小。当浓度大于或等于50微米醇/升时，可以在细胞中观察到明显的形态学变化，表明在该浓度范围内的光敏剂对细胞具有更大的影响。
2。当光敏剂浓度为100 μmol/L时，两种剂型甲基溴介导的光动力疗法对漂浮状态粪肠球菌有明显的杀灭效果，光照射和光敏剂单独处理对细菌的杀灭效果较弱，说明只有光源和光敏剂的联合作用才能使光动力疗法发挥最佳效果。
3。根管口光纤照射和根管内照射能明显杀死根管内粪肠球菌。提示光动力疗法治疗直根管的抗菌效果不受根管内光纤位置的影响。只要参数合适，光动力疗法就能充分发挥理想的治疗效果。
4。菌落计数法和扫描电镜观察结果表明，超声波冲洗结合等离子体消毒处理对根管内粪大肠杆菌感染的抗菌效果最为明显，单独等离子体消毒处理的抗菌率低于单独超声波冲洗处理，提示未来等离子体消毒应用于临床根管消毒时仍需要超声波冲洗才能达到最佳的抗菌效果。
参考
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