急性缺氧中UCH－L1在调控㬱－Syn中的生物学作用,急什么？没有成语

急性缺氧中UCH－L1在调控㬱－Syn中的生物学作用

没有关于什么是紧急的和什么不是紧急的习语。含有紧迫感的习语包括:勇敢向前，急于做出选择，急于成功，急中生智，快速英俊，勇敢地向前[解释]:在急流中勇敢向前，描述果断、勇敢、勇敢向前。“发自”:什么是“美丽的照片”:“人们站在这张照片前，感受到一种澎湃而勇敢的人类力量。

想顾客之所想,急顾客之所急什么意思

“焦虑的客人很焦虑”的意思是从客人在工作中的角度来思考问题，并对客人能想到的尽可能多的问题进行思考和提前安排。紧急客人急于把客人的事情当作自己的事情，并积极解决。 在客户服务工作中，只有客户最迫切想接触到并且不能再等待的习惯用语是不耐烦、不耐烦、迫在眉睫、燃烧、不耐烦、挑剔、焦虑等。 习语分析:1。迫不及待[解释]:紧急:紧急 迫不及待 描述某人的渴望 在《有影响力的领导者的七个习惯》一书中，作者以“重要和不重要”为水平坐标，“紧急和不重要”为垂直坐标，建立了一个坐标系来衡量员工所面临的各种事务。 在表现差或失败的员工中，许多人犯的最常见的错误是把“重要事项书”和“紧急事项”混为一谈，并使用恰当的词:匆匆忙忙的外表；匆忙出现 匆忙——和“匆忙”一样 jibo bo-仓促出场 匆忙或匆忙 紧急呼叫-与“紧急”相同 非常焦虑或匆忙的样子。 急吼的样子——心急的赶紧 急火——形容非常焦虑 紧急-1。描述紧迫性 2.描述穷人，焦虑，无法入睡，焦虑如热锅上的蚂蚁

急什么？没有成语

没有关于什么是紧急的和什么不是紧急的习语。含有紧迫感的习语包括:勇敢向前，急于做出选择，急于成功，急中生智，快速英俊，勇敢地向前[解释]:在急流中勇敢向前，描述果断、勇敢、勇敢向前。“发自”:什么是“美丽的照片”:“人们站在这张照片前，感受到一种澎湃而勇敢的人类力量。

想顾客之所想,急顾客之所急什么意思

急性缺氧中UCH－L1在调控㬱－Syn中的生物学作用范文

急性缺氧是机体在短时期内出现供氧不足或者组织供氧量不足的状态，从而导致机体组织能量代谢异常，引发代偿性和损伤性反应。脑是机体中对缺氧最敏感的组织之一，缺氧可引起认知功能损伤等神经性疾病，严重时可导致脑死亡。因此，探讨机体对低氧的感知和应答能力对维持脑正常生理功能具有重要意义。α - 突触核蛋白（ α - synuclein,α -Syn） 是一种小分子酸性可溶性蛋白，主要分布于脑内新皮层、海马、嗅球、背侧丘脑、纹状体、下丘脑、黑质及小脑等部位的神经元胞液中〔1〕。α -Syn 表达异常、聚集与神经退行性等多种疾病关系密切。泛素羧基末端水解酶 L1（ ubiquitin C - terminal hydrolaseL1,UCH - L1） 是泛素 - 蛋白酶体系统中的重要成员，除了具有去泛素化作用外，还有泛素连接酶和稳定细胞内泛素单体的功能〔2〕。有研究发现，UCH - L1 与 α- Syn 存在直接相互作用，可能在调控 α - Syn 表达水平中具有重要作用〔3〕。本研究利用 UCH - L1 基因敲除小鼠，探讨急性低压低氧条件下，UCH -L1 功能缺失对小鼠海马中 α - Syn 表达水平的影响，以期为阐明UCH - L1 在调控 α - Syn 中的生物学作用，以及治疗与 α -Syn 蛋白相关的神经系统疾病提供科学依据。

1材料和方法

1.1实验动物UCH-L1基因杂合子(UCH -L1+/-) C57BL/6J小鼠从美国MMRRC购买并繁殖获得[4]。雌性和雄性UCH -L1杂合小鼠用于繁殖后代小鼠。基因分型后，选择12周龄雄性野生型小鼠(UCH -L1+/+)和UCH -L1基因敲除纯合小鼠(UCH -L1-/-)进行实验。所有小鼠均饲养在军医学院卫生与环境医学研究所SPF动物室。

1.2个主要试剂和设备脱氧核糖核酸提取试剂盒和2 × TaqPCR主混合物(天根)。引物由北京英杰生命科技有限公司兔抗UCH -L1多克隆抗体和聚偏氟乙烯膜(Millipore Company)合成。兔抗LC3多克隆抗体和PMSF(phe-nyl甲磺酰氟、苄基磺酰氟、西格玛公司)、兔抗α-Syn多克隆抗体(abgent公司)、辣根过氧化物酶标记的GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、上海康城生物公司)、RIPA (RADIO免疫沉淀试验)裂解物(Bi田芸生物技术研究所)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(Boster公司)。低压氧动物舱(烟台宏远公司)、多skan MK3酶贴标机(热电公司)、蛋白质垂直电泳和转移系统(Bio -Rad公司)。

1.3通过聚合酶链反应鉴定小鼠基因型幼鼠在出生后4周与母鼠分离，组织约为0。从尾尖切下5厘米长，根据基因组DNA提取试剂盒的操作步骤提取小鼠基因组DNA。根据在我们的实验室[4]建立的聚合酶链反应方法鉴定小鼠基因型。聚合酶链反应产物用2%琼脂糖凝胶电泳分析。野生型小鼠(UCH-L1+/+)的扩增产物为213 bp片段，杂合子小鼠(UCH -L1+/-)分别为213 bp和447 bp片段，纯合子小鼠(UCH-L1-/-)为447 bp片段。

1.4急性低压缺氧动物模型将急性低压缺氧组置于低压氧气室内，以15 m/s的速度升至3000 m的高度3分钟，然后以同样的速度升至5000 m的高度5分钟，最后升至8000 m的高度8小时，实验结束后以15 m/s的速度降至海平面。对照组接受常规喂养，不接受低压缺氧治疗。

1.5蛋白印迹法检测小鼠蛋白表达水平。麻醉后，海马体被迅速取出并储存在液氮中。将200 μl RIPA蛋白裂解物加入海马组织的每一侧，并在玻璃研磨机中在冰浴中研磨。吸取研磨后的溶液并放入极压管中，以12 000转/分钟离心30分钟(4℃)，取上清液。BCA法定数量。蛋白质样品(40μg/泳道)经电泳分离，转移到聚偏氟乙烯膜上。

聚偏氟乙烯膜用5%脱脂奶粉密封1小时，然后在4℃下与抗UCH- L1抗体(1∶ 10 00)、抗LC3抗体(1∶1000)、抗α -Syn抗体(1∶300)和抗GAPDH抗体(1∶ 10 000)孵育过夜，PBST膜洗涤3次，与辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG (1∶ 10 000)孵育1小时。洗涤膜3次后，化学发光显色。

1.6图像观察与分析利用图像J软件分析蛋白质条带的吸光度值。以GAPDH为参照，靶蛋白吸光度与内部参照的比值代表靶蛋白的相对表达。结果用平均标准差表示结果。所有数据用SPSS 19进行分析。0软件。

2结果

2.1小鼠基因型鉴定根据孟德尔遗传定律，雄性和雌性杂合子交配，它们的后代可能有3种基因型:野生型(UCH -L1+/+)、杂合子(UCH-L1+/-)和纯合子(UCH-L1-/-)。从杂交一代小鼠的尾尖提取了脱氧核糖核酸。吸光度值(A)都在1的范围内。8 ~ 2。0，符合聚合酶链反应模板的要求。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定聚合酶链反应扩增产物，以鉴定小鼠的基因型。图1显示了同一窝小鼠的基因型鉴定结果。从图中可以判断，小鼠1、2、4和7的基因型是UCH-L1+/+，小鼠3是UCH-L1-/-，小鼠5和6是UCH-L1+/-。

2.2急性低压缺氧对野生型小鼠海马α-突触素和UCH -L1表达的影响急性低压缺氧处理后野生型小鼠海马α-突触素和UCH-L1蛋白表达水平的变化。结果表明，与未治疗的对照组(0.702±0.121)相比，急性低压缺氧组(1.310±0.096)海马α-Syn蛋白表达水平升高。p 2.3 UCH-L1基因敲除对急性低压缺氧小鼠(UCH -L1+/+)和UCH-L1基因敲除纯合小鼠(UCH -L1-/-)海马α-突触素表达的影响分别提取海马蛋白检测α-突触素表达水平。结果表明，与野生型急性低压缺氧小鼠(1.490±0.074)相比，UCH-L1-/-小鼠海马中α-突触素的表达水平显著降低(0.952±0.093)(p < 0.05)(图3)，提示在急性低压缺氧条件下，UCH-L1基因的敲除促进了α-突触素的降解。

2.4 UCH-L1基因敲除对急性缺氧小鼠海马细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响为了探讨急性低压缺氧条件下UCH-L1基因敲除促进α-Syn降解的机制，检测了急性低压缺氧和UCH-L1基因敲除对细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响。结果表明，与野生型小鼠(0.174±0.006)相比，简单敲除UCH -L1基因对LC3ⅱ/ⅰ(0.176±0.007)无影响；急性低压缺氧可提高野生型小鼠海马LC3ⅱ/ⅰ(0.215±0.007)水平，UCH-L1基因敲除后LC3ⅱ/ⅰ(0.301±0.008)水平更为显著，P 3讨论

α-syn是由140个氨基酸组成的神经元蛋白，其异常聚集是许多神经退行性疾病的致病因素之一[5]。研究发现α-突触存在于帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩和其他几种神经退行性疾病患者的路易体、路易体神经突起和寡核苷酸变性包涵体中，这些疾病被称为突触核蛋白病[6]。突触核蛋白疾病代表一组神经退行性疾病。突触核蛋白聚集物在神经元和神经胶质细胞中的沉积是这些退行性疾病的常见致病机制。

因此，及时清除毒性聚集物和具有聚集趋势的α-突触核蛋白非常重要。在细胞中，α-突触主要通过泛素-蛋白酶体途径和自噬-溶酶体途径[7] 1被去除。当这两条路径被破坏时，将会导致α-Syn沉积。一些研究发现，抑制UCH-L1基因表达可诱导体外培养海马细胞中α-突触素表达水平显著增加，表明UCH-L1调节正常生理条件下海马细胞中α-突触素的正常降解[8]。众所周知，UCH-L1调节细胞中泛素水平的稳定性。缺乏UCH-L1可导致细胞[9]中泛素水平的降低，α-突触素的正常降解是通过泛素-蛋白酶体途径进行的。因此，在正常生理条件下，UCH-L1具有解聚酶的功能，并在调节α-合成酶中发挥作用。本研究探讨急性低压缺氧条件下小鼠海马α-突触素表达水平的变化及UCH-L1对其表达水平的调节。

结果表明，急性低压缺氧可诱导小鼠海马α -Syn表达水平升高。根据生理条件下UCH-L1对α-突触素表达水平的影响结果，[8]，我们推测，如果UCH-L1基因在这种急性低压缺氧条件下被敲除，小鼠海马中α-突触素的表达将更加明显地增加。然而，实际结果表明，UCH-L1基因的敲除可以显著降低小鼠海马中α-突触素的表达水平。提示UCH-L1在急性低压缺氧条件下对小鼠海马α-突触素的调节可能有其他机制，促进过量α-突触素的清除。

细胞自噬是去除多余蛋白质的重要机制之一，也是α-突触素降解的重要途径。LC3是一种重要的自噬标记分子。当自噬发生时，LC3I的表达水平会明显增加，因此可以通过检测LC3I的表达水平来判断是诱导还是抑制自噬。我们初步探讨了UCH-L1对急性低压缺氧条件下细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响。发现UCH-L1基因敲除后小鼠海马LC3ⅱ/ⅰ显著增加，提示UCH-L1基因敲除可能通过促进急性低压缺氧下细胞自噬导致α-突触蛋白表达水平下降。然而，其生物学机制仍需进一步研究。

参考:

〔1〕金伟世，格达尔·金，韩礼德，刘明明，路易体病中的α-突触素生物学〔J〕.阿尔茨海默病研究，2014，6( 5) : 73 .

[2]龚兵，乐兹尼克.泛素C -末端水解酶L1在神经退行性疾病中的作用[J].药物新闻展望，2007，20( 6) : 365 .

〔3〕安田，倪海拉，任永瑞，等. UCH- L1对帕金森病α-突触核蛋白过度表达小鼠模型的影响〔J〕.《神经化学》，2009，108( 4) : 932 .

[4]武磊、赵波、张志庆等。UCH-L1敲除小鼠[的选育、繁殖和鉴定。解放军预防医学杂志，2013，31( 5): 388。

〔5〕 BRAITHWAITE S P，STOCK J B，MOURADIAN M . M .α-突触核蛋白磷酸化作为Par-kinson病的治疗靶点〔J〕. Rev Neurosci，2012，23( 2) : 191 .

〔6〕VEKRELIS K，XILOURI M，EMMANOUILIDOU E，金属。α -突触核蛋白在神经疾病中的病理作用[J].柳叶刀神经杂志，2011，10( 11) : 1015 .

[7]张万青、严家庆、佐为等。α-突触核蛋白与蛋白质降解系统的相互作用[。生理科学进展，2014，45( 2) :159。

〔8〕卡地亚·阿·英，UBHI K，SPENCER B，等.α-突触核蛋白病类帕金森病模型中UCHL1调节对α-突触核蛋白的微分效应〔J〕.《公共科学图书馆》，2012，7( 4) : e34713 .

〔9〕大阪H，王永升，高田K，等.泛素羧基末端水解酶L1与神经元结合并稳定神经元中的孤啡肽〔J〕.哼摩尔遗传学，2003，12( 16) : 1945 .