38000字硕士毕业论文植物种子总生物碱的筛选及其生物活性

论文类型：硕士毕业论文

论文字数：38000字

论点：生物碱,试验,作用

论文概述：

采用超声波辅助提取法提取沙冬青种子总生物碱，工艺简单，提取效率高，节约时间和成本。沙冬青种子总生物碱的最佳提取条件为：pH 为 2.5 的盐酸水溶液、料液比 1∶30、提取温度 30℃、提取

论文正文：

第一章文献综述及前言

1沙冬青的研究进展
沙冬青终年常绿，抗旱耐寒。它是干旱沙区沙漠治理造林和园林绿化中的珍稀树种。它抗旱耐盐性强，是一种优良的固沙灌木。沙冬青种子呈扁平肾形、黄褐色、革质，可用于提取特种工业用油，其枝叶可用作祛风、活血、止痛的药物，可用于治疗冻疮、慢性风湿性关节炎等的外敷。沙冬青原植物见图1-1。

1.2沙冬青及其种子化学成分的研究现代
研究表明沙冬青及其种子主要含有生物碱、有机酸、黄酮类、异黄酮、芪类等。其中，沙冬青枝叶中所含的生物碱主要包括:左旋黄嘌呤、鹰钩藤碱(也称为金雀花碱、雀花碱、羽扇豆碱、α-异花Sparteine、黄素、异黄酮、3a-羟基羽扇豆碱、哌胺、九、17-氧代雀花碱、α-异羽扇豆碱、高莫沙林、高哌酮、菊花碱等。黄酮成分包括7-3’-二羟基-4’-甲氧基异黄酮(7，3’-二羟基-4’甲氧基黄酮)、4-甲氧基异黄酮-7-β-D-吡喃葡萄糖苷(4’-甲氧基黄酮-7-β-D-吡喃葡萄糖苷)、芒柄花素、3’-羟基芒柄花素、6，4’-二羟基-7-甲氧基异黄酮、芒柄花素、7-羟基-4’-甲氧基异黄酮、羊毛异黄酮等。该产品还含有白藜芦醇、大豆苷元、松脂醇、水杨酸β-谷甾醇、间羟基苯甲酸等。然而沙冬青种子中所含生物碱主要包括:司帕坦、17-氧代司帕坦、β-异司帕坦、3α-羟基司帕坦、3β-羟基司帕坦、羽扇豆碱等。其中，司帕坦是最重要的成分。

1.3沙冬青的药理作用

1.3.1抗肿瘤效果
贾宣等人通过动物实验发现沙冬青提取物(JA1)对肝癌、宫颈癌有明显疗效，其肝癌抑制率为42.9%。贾宁等[16-18]通过一系列体外试验证明沙冬青提取物(JA1)对体外培养的人肝癌HCC细胞、体外培养的小鼠肝癌细胞系H22和体外培养的Hep细胞具有明显的抑制作用。体内试验进一步证明JA1对小鼠皮下移植Hep肿瘤和小鼠皮下移植肿瘤H22的生长也有明显的抑制作用。康凯等人用单管法完成端粒重复扩增(TRAP)法检测沙冬青生物碱对体外培养的鸡马立克氏病肿瘤HDCC-MSB1细胞端粒酶活性有显著抑制作用，表明沙冬青生物碱能抑制鸡马立克氏病肿瘤细胞的增殖。

1.3.2杀虫效果
沙冬青含有喹啉类生物碱，约为170种生物碱，对植物病毒、细菌、真菌和松材线虫有活性。少量生物碱，如鹰嘴豆碱，已用于制药工业，并发展成为商业杀虫剂。

2生物碱研究进展

2.1生物碱概述
生物碱是指一类来源于生物(主要是植物群)的含氮有机化合物(氨基酸、氨基酸糖、肽、蛋白质、核酸、核苷酸和含氮维生素除外)。它们中的大多数具有更复杂的环结构，氮原子结合在环中。它们大多数是碱性的，能与酸形成盐。它们大多具有明显的生理活性，是中草药的重要有效成分之一。它们大多为无色结晶固体，不溶于水，但与酸结合后可溶于水，熔点和光学活性明显，口感苦，挥发性弱。
生物碱发现于19世纪早期，是最早和研究最多的天然有机化合物。中国最早的记录是从乌头中提取的乌头碱，在17世纪初的《白猿经》一书中用作箭毒。在欧洲，1803年，第一个纯生物碱麻醉剂被德罗斯尼从鸦片中分离出来。1806年，德国助理药剂师塞尔土纳(Serturner)从鸦片中分离出吗啡，并首次报道吗啡具有碱性。因此，它曾被称为植物碱。1810年，西班牙医生戈梅斯从金鸡宁树皮中分离出结晶金鸡宁诺(奎宁和金鸡宁的混合物)。1819年，维斯纳称从植物中获得的碱样化合物为生物碱或生物碱。由于提取、分离和鉴定方法的不断发展，生物碱的种类和数量迅速增加。据统计，1952年前发现生物碱950种，1962年达1107种，1972年达3443种。目前，已发现10，000多种生物碱，并且仍以每年约100种的速度增加。
生物碱类化合物具有显著而特殊的生物活性，往往是许多具有镇痛作用的中草药和药用植物如吗啡和延胡索乙素的有效成分。曼陀罗、颠茄和天仙子胺中的东莨菪碱具有解痉和有机磷中毒作用。黄连和黄柏中的小檗碱、苦参生物碱和蝙蝠葛碱具有抗菌消炎作用。萝芙木呕吐物中的利血平具有降低血压的作用。麻黄中的麻黄碱具有镇咳和平喘作用。金鸡纳树皮中的奎宁具有抗疟药物的作用。苦参碱和氧化苦参碱具有抗心律失常作用。喜树碱、秋水仙碱、长春新碱、三尖杉酯碱、紫杉醇等。具有不同程度的抗癌作用。

第三章小鼠急性毒性试验............................32-36
1材料和方法............................32-33
1.1材料............................32
1.2方法............................32-33
2结果和分析............................33-35
2.1预测试结果............................33
2.2官方测试结果............................33-34
2.3急性毒性试验的临床观察............................34
2.4病理观察............................34-35
3讨论............................35-36
第四章牛病毒性腹泻病毒的体外试验............................36-48
1材料............................36-37
1.1牛病毒性腹泻病毒............................36
1.2单元............................36[/溴/] 1.3试验药物............................36
1.4测试试剂............................36-37
1.5测试仪器............................37
2测试方法............................37-40
2.1细胞培养............................37-38
2.2微量中和试验测定............................38
2.3细胞毒性试验............................38-39
2.4实验分组............................39[/比尔/] 2.5体外抗病毒试验............................39-40
2.6统计处理............................40
3结果............................40-46
4讨论............................46-48

结论

(1)采用超声波辅助提取法从沙冬青种子中提取总生物碱，工艺简单，提取效率高，省时省钱。沙冬青种子总生物碱的最佳提取条件为:盐酸水溶液，2.5，固液比1: 30，提取温度30℃，提取时间1.5h，超声波频率60Hz。沙冬青种子总生物碱含量可达2.868%。
(2)沙冬青种子总生物碱急性毒性试验表明，沙冬青种子总生物碱口服给药小鼠的LD50值为588.71毫克/千克，LD50 95%置信限为513.93 ~ 674.37毫克/千克/千克，符合低毒性标准[85(501 ~ 5000毫克/千克为低毒性化合物)；通过对存活小鼠生存状态的观察，沙冬青种子总生物碱对小鼠的持续作用很小。根据死亡小鼠在试验期间的病理观察，沙冬青种子中总生物碱的毒性靶器官可能是肝脏。
(3)沙冬青种子总生物碱具有抗BVDV效应。将总生物碱与等量的病毒悬液混合，然后直接接种到单层牛肾原代细胞中吸附2.5h，将上清液变为含药的维持液即可获得最佳抗病毒效果。