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论文范文探讨他汀类药物对胶质细胞ABCA1基因表达的影响

论文类型:论文范文
论文字数:
论点:辛伐他汀,胶质,基因
论文概述:

这篇论文由硕博论文网硕士论文中心整理提供,主要从探究他汀类药物对神经胶质细胞ABCA1基因表达的影响,为进一步认识脂代谢异常与老年痴呆症的相互关系提供了一定的实验依据。

论文正文:

引言:本文由硕博论文网硕士论文中心组织和提供。主要探讨他汀类药物对神经胶质细胞ABCA1基因表达的影响,为进一步了解脂代谢异常与老年痴呆症的关系提供一定的实验依据。

摘要:目的观察他汀类药物对神经元和星形胶质细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白1 (ABCA1)基因表达的影响。方法用辛伐他汀和普伐他汀在不同浓度和不同条件下孵育原代人星形胶质细胞和HCN 2神经元细胞。使用从培养细胞中分离的核糖核酸,我们进行定量聚合酶链反应来测量星形胶质细胞和神经元中的ABCA1基因表达。蛋白质印迹法检测ABCA1蛋白的表达。结果两种他汀类药物均显著降低ABCA1基因和蛋白表达。与普伐他汀相比,辛伐他汀显著降低神经元和星形胶质细胞中ABCA1的表达,分别为95%和75%(两者均为P关键词:三磷酸腺苷结合盒转运蛋白1(ABCA1);辛伐他汀;目的观察他汀类药物对神经细胞和胶质细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白1基因表达的影响。方法培养人神经细胞和胶质细胞。辛伐他汀和普伐他汀分别以不同浓度加入。培养不同时间后,提取细胞总核糖核酸和细胞质蛋白。逆转录聚合酶链反应检测ABCA1基因的表达,蛋白印迹检测ABCA1蛋白。结果辛伐他汀和普伐他汀显著降低ABCA1基因和蛋白的表达,辛伐他汀的作用明显优于普伐他汀(辛伐他汀分别降低神经元和胶质细胞ABCA1基因表达95%和75%,[关键词]三磷酸腺苷结合盒转运体1;辛伐他汀;普伐他汀

他汀类药物是一种常用的降血脂药物[12],其主要成分是羟甲基戊二酰辅酶a还原酶抑制剂,羟甲基戊二酰辅酶a还原酶是胆固醇合成的限速酶。辛伐他汀和普伐他汀已广泛用于高脂血症的临床治疗。因为该药物阻断甲羟戊酸的生化途径,它不仅能抑制胆固醇的合成,降低血浆低密度脂蛋白水平,防止巨噬细胞向泡沫细胞转化,而且还能显著降低高脂血症引起的动脉粥样硬化疾病的死亡率[3]。此外,研究表明他汀类药物也能增加血浆高密度脂蛋白

Hdl和载脂蛋白a。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白1 (ABCA1)是三磷酸腺苷结合盒转运蛋白之一。它利用三磷酸腺苷(三磷酸腺苷)作为能量来促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出,并在胆固醇逆向转运(RCT)和高密度脂蛋白生成的最初步骤中发挥重要作用。ABCA1基因错义突变引起的杂合子丹吉尔病是由apoA介导的胆固醇流出量、高密度脂蛋白胆固醇浓度和粒径的降低引起的[4]。作为潜在的抗动脉粥样硬化靶点之一,上调ABCA1基因的表达具有重要意义。ApoA是高密度脂蛋白中的主要蛋白质,也是细胞中胆固醇逆向转运的一个特殊重要因素。ApoA能与磷脂、各种血浆因子和细胞膜受体结合,能激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT),并在促进细胞内胆固醇的去除、酯化、转移和调节高密度脂蛋白代谢方面发挥作用[5]。

以前的学者认为他汀类药物可能对老年痴呆症有一定的预防作用[6]。然而,近年来,越来越多的报道称他汀类药物可能导致老年痴呆症或加重原有症状[79]。目前,还没有关于他汀类药物对中枢神经系统ABCA1基因影响的报道。本实验通过观察辛伐他汀和普伐他汀对正常神经细胞和神经胶质细胞ABCA1基因表达的影响,初步解释了他汀类药物可能导致老年痴呆症或加重患者症状的原因,为进一步揭示他汀类药物的作用机制及其与神经系统神经退行性疾病的关系奠定了一定的基础。

1材料与方法[/BR/] 1.1材料神经细胞系HCN-2(CRL-10742)购自美国ATCC公司,神经胶质细胞系保存于本实验室。辛伐他汀、普伐他汀、甲羟戊酸、FPP和GGPP均购自西格玛公司。核糖核酸提取试剂盒购自美国的恰根公司。mem-PER真核细胞膜蛋白提取试剂盒购自美国皮尔斯公司。

1.2方法[/比尔/] 1.2.1细胞在神经元和胶质细胞的常规培养中培养。细胞分别在含有150毫升/升和50毫升/升胎牛血清的DMEM培养基中培养。将细胞汇集成碎片后,进行胰蛋白酶消化,并将细胞分别转移到12孔板中。将细胞置于50毫升/升CO2培养箱中,在37℃培养和观察,直到细胞生长成碎片。用无血清培养基制备5μmol/L辛伐他汀、20μmol/L普伐他汀、100μmol/L甲羟戊酸、10μmol/L FPP、10μmol/L GGPP,并充分混合。分别建立空白色对照组、辛伐他汀实验组、普伐他汀实验组、辛伐他汀+甲羟戊酸实验组、普伐他汀+甲羟戊酸实验组、辛伐他汀+FPP实验组、普伐他汀+FPP实验组、辛伐他汀+GGPP实验组、普伐他汀+GGPP实验组。放入培养箱中继续培养48小时。

1.2.2反转录反应离心收集细胞,预冷的PBS洗涤一次,然后用QIAGEN试剂盒提取细胞总核糖核酸。取细胞总核糖核酸1微克,5×反转录缓冲液5微升,核糖核酸酶(40u/微升)20u,10毫升/微升4×脱氧核糖核酸2微升,用DEPC处理的H2O补足至23微升。混合均匀后,在70℃反应5分钟,加入2μL逆转录酶,在37℃反应1小时,在90℃热灭活5分钟,在-20℃保存备用。

1.2.3用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测ABCA1·
abprism 7700序列检测器荧光定量聚合酶链反应仪,以18S为内标。反应体系如下:吸取5微升逆转录反应产物、10微升上游引物和10微升下游引物、5微升荧光探针、10微升5×聚合酶链反应缓冲液、10微升4×脱氧核糖核酸1微升、1.5微升(2u/微升)Taq脱氧核糖核酸聚合酶,用灭菌纯水补充至50微升,在93℃预变性3分钟后对PE7000(美国ABI公司)进行循环建立了阴性对照和阳性梯度对照,并用计算机软件对实验结果进行了分析。引物序列如下:F:5 \' tggtTCTATCGCCCGTGA 3 \';r:5 ′- ACCTTAGATCCCCCGCAAAG-3 ′.

1.2.4用蛋白质印迹法测定神经元和胶质细胞中ABCA1蛋白的变化。通过离心收集细胞。用预冷的PBS洗涤一次后,用Mem-PER真核细胞膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白。采用bio-Rad垂直电泳装置进行电泳,膜采用半干法转移。杂交是根据KPL的蛋白质检测器蛋白质印迹试剂盒说明书进行的。ABCA1一级抗体购自诺武。

  1.3 统计学处理 所有实验数据以
  ±s表示,使用Statistica软件(美国,StatSoft Inc)分析。采用MannWhitney U检验和t检验,P