34900字硕士毕业论文基因工程硕士论文:马尔科夫珠蛋白基因和Toll受体基因的克隆和功能分析

论文类型：硕士毕业论文

论文字数：34900字

论点：贝壳,文石,晶体

论文概述：

分离鉴定珍珠贝矿化相关基因与免疫相关基因，不仅有助于深入研究贝壳以及珍珠形成的分子机制，揭示贝类免疫规律，在理论上具有重要意义。同时，也能够为通过生物工程育种手段获得新品

论文正文：

1.文献评论

1.1生物矿化
生物诱导矿化受环境影响很大。没有特殊的细胞组织或生物大分子来调控，形成的晶体取向是随机的。然而，生物控制矿化是在少量有机基质的精确控制下，在生物体特定部位的成核、生长、相变等过程，不受外部环境的影响，最终形成具有独特晶体习性和规则晶体排列的生物矿物聚集体
1.2.1贝壳的超微结构
贝壳生物矿化的最终产物是贝壳或珍珠。贝壳的形状各不相同，但一般来说，软体动物的贝壳从外向内分为外部有机层(角质层)和内部钙化层([14)。角质层是由硬化蛋白组成的非常薄的非矿化有机层，内部的钙化层是通过生物矿化形成的，由外部茶褐色棱柱层和内部闪亮的珍珠质[15]组成。两者的矿化晶体形式不同。棱柱层中的主要碳酸钙晶体是方解石(acclite)，珍珠层中的主要碳酸钙晶体是arganotie。两种晶型的主要区别在于晶体中Ca2+和CO32-之间的距离导致不同的稳定性。热力学上，方解石比文石稍稳定。在扫描电子显微镜下，棱柱层通常由大量平行的柱状方解石晶体[16]组成，其横截面为多边形。每个多边形柱状晶体被一层有机基质[7包围。贝壳珍珠层由文石晶体沉积形成。在电子显微镜下，观察到单个文石板厚约0.4-0.5μm，宽约5-10μm，呈准六边形。每一片都紧密地分层排列成“密缝砖状”结构。文石板和层状结构被有机基质填充，使得文石薄片的排列非常接近[18-19]。文石晶体和有机基质的“密缝砖结构”的紧密结合使珍珠层的抗断裂能力比纯文石晶体高三个数量级，也使珍珠层成为材料科学研究的热点材料之一，[18，[20-26]。此外，钙化的贝壳层有许多不同的结构。更常见的是由沿贝壳方向层层排列的方解石形成的叶理层，以及由横向平行排列的层状文石晶体形成的交错纤维层[[27-28]。珍珠的形成也是生物矿化研究的热点之一，[29-31]。珍珠的形成与珍珠贝壳的形成基本相似，只是前者是珍珠囊的产物，后者是地幔的产物。珍珠囊细胞分泌的珍珠在异物周围形成文石碳酸钙沉积物，最终形成珍珠[32】。所以珍珠实际上就像球形贝壳。研究珍珠质的形成机理，对于揭示珍珠和贝壳形成的奥秘，促进珍珠产业的发展和珍珠产品的应用具有重要意义。。本文讨论的生物矿化是受生物控制的矿化。软体动物壳和珍珠的形成是由有机大分子控制的最典型的生物矿化过程。形成的壳主要是由方解石和文石晶体与有机基质紧密结合而成的高度有序的多层结构。由于有机基质的参与，贝壳和珍珠的高度有序晶体复合物与无机CaCO3晶体相比具有许多特殊性质，如极高的强度、优异的断裂韧性、减震性、表面光洁度和许多其他特殊功能[5】。它为纳米材料和仿生材料等新材料的开发提供了新思路[6-7]。同时，贝壳及其衍生珍珠因其光泽的外观和美丽的造型成为人们喜爱的装饰品之一，具有很高的经济价值。珍珠也是一种非常有价值的药物，它在2000多年前的[被应用于中美洲的牙齿移植。珍珠粉在中国古代被用于20多种中药，如六神丸、真镜丸等。珍珠粉在当前的整形外科手术中也被广泛用于刺激成骨细胞的生长
(1)RACE获得了TLR3 894bp的部分cDNA序列，可编码168个氨基酸，3’-UTR为385bp，聚腺苷酸为13 A长。
(2)qRT-PCR检测到TLR3基因在8个组织中表达，最明显的是血淋巴，其次是内收肌，在其他组织中表达更稳定。
(3)核糖核酸抑制试验结果:当TLR3-脱氧核糖核酸探针的注射量达到5ug时，TLR3的表达量减少17%，当注射量为30 g时，TLR3的表达量减少49%。注射聚酰亚胺(500克)后，TLR3表达增加52.2%。[/比尔/] (4)核因子κb的变化:当TLR3-脱氧核糖核酸注射量为30 g时，核因子κb的表达量减少52.29%。注射聚酰亚胺后，核因子κ B的表达量增加了57%。在相同处理下，核因子κb的表达变化与TLR3的变化一致。。近年来，还发现珍珠质材料被无排斥反应地移植到哺乳动物或人体的骨骼系统中，这为珍珠质材料在治疗人类骨质疏松症、骨损伤和其他相关疾病中的应用带来了期望，[10-13]。因此，负责贝壳和珍珠形成的大分子及其调控机制成为国内外学者研究的热点。

1.2马氏珠母贝壳珍珠形成的研究现状

[4]

2。DPT基因的克隆、表达及功能研究

2.1导言
壳的形成是一个非常复杂和精确的过程。壳层的形成有其自身的特点，并且受到分离方法和低蛋白质含量等因素的限制。蛋白质功能的研究仍处于推测阶段。目前，壳基质蛋白的分离纯化刚刚开始，与生物矿化相关的功能基因的分离鉴定方兴未艾。以前的研究表明，在自然条件下形成壳的碳酸钙晶体不是在单一蛋白质的作用下形成的，而是多种蛋白质共同作用的结果，不同蛋白质的表达受到严格的调控。因此，不仅需要进一步分离和筛选壳基质蛋白及其基因，还需要分离和鉴定在矿化过程中可能具有调节作用的蛋白，并进一步研究相关蛋白在壳形成过程中的作用机制。皮抑素广泛存在于各种动物的细胞外基质中，在细胞-细胞相互作用和基质组装中发挥重要作用。这种外螺旋蛋白存在于脊椎动物的一些矿化组织中，如骨骼和牙齿[136]，在骨骼和牙齿的形成中起着非常重要的作用。在贝类中，皮肤素首先从淡水光滑的光滑双壳里拉的交织纤维中提取，它被认为是贝壳基质蛋白[56]，[137]和不溶性基质蛋白的重要成分。因此，据推测，它为生物矿化中晶体的结晶、成核和生长提供了结构支持，[。因此，对皮肤素功能和机理的研究为揭示贝壳和珍珠的矿化机理打开了一扇大门。

Toll样受体基因[/BR/] 3的克隆、表达及功能研究……39-46[/比尔/] 3.1导言……39-40
3.2材料……40[/比尔/] 3.3方法……40[/比尔/] 3.4结果……40-44
3 . 4 . 1 TLR 3比赛结果……40-41
3 . 4 . 2 tR3race的序列分析……41-42
3 . 4 . 3 TLR3荧光定量结果……42[/比尔/]3 . 4 . 4 TLR3核糖核酸抑制试验的结果……42-44[/比尔/] 3.5讨论……44-45
3.6概述……45-46

结论

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参考
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