51500字论文格式青蒿琥酯对急性胰腺炎动物模型的治疗作用及其机制

前面陈述的第一章

急性胰腺炎并不局限于胰腺和周围组织的局部炎症反应，而是会产生低血压、器官灌注不足、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官衰竭综合征(MODS)等症状，直至死亡[1]。后者是全身炎症反应综合征。重症胰腺炎早期胰腺无菌性坏死和胰酶激活是一个复杂的过程。胰腺释放的内容物刺激机体产生大量细胞因子和炎症介质，引起持续的全身炎症反应，最终导致机体组织和器官功能障碍或机能障碍[2]。目前，感染和全身炎症反应综合征被认为是影响SAP [3]发生、发展和结果的关键环节。在正常情况下，急性胰腺炎的病情是轻而易举的，但四分之一的患者最终被诊断为重症胰腺炎，要么是由于局部并发症，要么是由于全身并发症。将近一半的重症急性胰腺炎患者会出现全身炎症反应综合征，20-30%的患者会死于多器官功能障碍综合征。一些研究表明，重症胰腺炎并发全身炎症反应综合征的时间越长，患者的预后越差。鉴于重症胰腺炎患者手术时机的选择是临床实践中最有争议的话题之一，急性胰腺炎的治疗仍然主要以医学综合治疗为主，目前还没有非常有效的治疗这种炎症的药物，因此寻找抗炎治疗药物具有重要的经济价值和社会意义。

青蒿琥酯是抗疟药青蒿素的水溶性衍生物。青蒿琥酯具有多种药理作用，并已被证明具有多种药理活性，如抗疟疾、抗肿瘤、治疗弓形虫感染、抗血吸虫、抗妊娠、抗哮喘、抗病毒等，[4]。此外，大量文献报道了青蒿琥酯的抗炎作用。梁爱华等人报道青蒿琥酯在体内和体外显著抑制内毒素激活巨噬细胞，从而表明青蒿琥酯可以减轻内毒素引起的炎症反应[5][6]。王妍妍等人报道青蒿琥酯可以显著降低滑膜细胞中Bcl-2和NF-κB的蛋白表达水平，从而有效改善佐剂性关节炎大鼠滑膜病变[7]；据报道，青蒿琥酯通过调节NF-kB活性抑制脂多糖诱导的类风湿性关节炎滑膜细胞分泌肿瘤坏死因子-α，表明青蒿琥酯可能具有抑制类风湿性关节炎滑膜炎的作用[8]。陈。等人发现中等剂量的青蒿琥酯对小鼠模型如系统性红斑狼疮和变应性接触性皮炎[9]具有良好的抑制作用；高醇芳等人还发现青蒿琥酯对小鼠系统性红斑疮模型有明显的治疗作用。我们组以前的研究也表明青蒿琥酯对脂多糖诱导的单核细胞释放炎症因子有抑制作用，并对细菌脓毒症模型小鼠[11]有显著的保护作用。综上所述，急性胰腺炎是一种由局部炎症发展为全身炎症的炎症性疾病，青蒿琥酯具有一定的抗炎作用，因此推测青蒿琥酯可能对急性胰腺炎有治疗作用。本课题首先分别建立小鼠和大鼠急性胰腺炎模型。基于这些模型，研究青蒿琥酯对急性胰腺炎的治疗作用。为了阐述青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的潜在能力，促进急性胰腺炎治疗的研究进展。

第二章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用

2.1材料和方法

2.1.1实验动物:昆明小鼠(清洁级)，18-22 g，4-6周，雌雄各半，第三军医大学实验动物中心，许可证号SCXK-(陆军)2007015。

2.1.2西南制药公司主要试剂生理盐水

雨兰素多肽生物工程(上海)有限公司

脂多糖(大肠杆菌055:B5)美国西格玛公司

4%多聚甲醛武汉博斯特公司

桂林南药青蒿琥酯注射液有限公司

南京程健研究所淀粉酶试剂盒

南京程健研究所胰蛋白酶试剂盒

南京程健研究所脂肪酶试剂盒

南京程健研究所超氧化物歧化酶试剂盒

2.1.3主要仪器

YP6001M台式电子天平上海科学仪器有限公司

上海航平电子天平科学仪器有限公司

沈阳龙腾电子有限公司MA11 0分析天平

照相机日本佳能公司

SC-15数控超级恒温器宁波新智生物有限公司

GB11240-89电加热恒温水浴锅北京医疗设备有限公司

德国IKA涡旋振荡器

SC-48高通量组织粉碎机宁波新智生物有限公司

美国热电公司，1500-741全波长扫描仪

美国西格玛公司，3K18低温高速离心机

TDL-50B离心机台低速上海安亭科学仪器厂

净水器密理博公司

美国康宁公司，96孔板

移液器Eppendorf公司

上海坎德利公司无菌注射器

海尔冰箱集团

LKB2088超薄切片机徕卡公司

泰克奈10透射电子显微镜飞利浦公司

上海科技大学SKT84聚合釜

LKB7800 Bromma公司

MN-72型磨刀机SAKURA

微型切片机中的820型AO公司

日本奥林巴斯公司CH30光学显微镜

日本奥林巴斯公司显微照片

2.1.4动物模型制作

从2.1.4.1三一大学实验动物中心购买16只健康清洁昆明小鼠，体重18-22 g，雄性8只，雌性8只，许可证号SCXK-(陆军)2007015。

分别称取16只小鼠后，2.1.4.2将其完全随机分为两组，每组8只。即正常组和模型组；

2.1.4.3的16只实验小鼠在服药前禁食14小时，但它们应该正常喝水。

2.1.4.4用无菌生理盐水分别制备铃蟾肽10微克/毫升和脂多糖1毫克/毫升。脂多糖的制备方法包括:在相应的无菌生理盐水中加入适量脂多糖冻干粉，振荡2-3小时，静置至完全溶解；

2.1.4.5腹腔注射铃蟾肽100 μg/kg，每小时一次，连续注射6次。注射铃蟾肽6次后，立即腹腔注射10毫克/公斤脂多糖诱导急性胰腺炎模型。

取2.1.4.6血后，用颈椎脱臼法处死小鼠，剖腹取胰腺称重。

2.1.4.7观察胰腺和周围组织，拍照并称重:记录水肿、充血、坏死等现象；2.1.4.8取适量胰腺组织，按体积(毫升):重量(克)=9:1的比例，加入9倍于4℃预冷的生理盐水，然后用高通量组织粉碎机制备浓度为原组织10%的组织匀浆(研磨20 s/次，50 Hz，3-4次，冰浴中进行)，离心10分钟，3500转/分钟，取上清液，于-20℃保存，生化指标待定；

2.1.4.9建模完成后18小时采血，用轨道采血法采集实验小鼠血液，不加抗凝剂。采集的血样在4℃放置2 h后，以3500 r/min离心12分钟，取上清液放入-20℃冰箱中检测各种生化指标。2.2结果

2.2.1模型建立后相关指标的检测

2.2.1.1模型小鼠胰腺组织的大体观察

正常组小鼠饮水，活动良好，无任何异常反应。解剖时，观察到该组小鼠胰腺组织无明显异常，胰腺和周围组织的结构边界非常清楚。胰腺颜色正常，未观察到水肿、充血等现象；腹腔内无明显积液。无出血或坏死病变。模型组成功建立急性胰腺炎模型后18小时，胰腺组织体积增大，胰腺质地稍硬，边界结构模糊，出现明显肿胀充血。胰腺头尾水肿最为突出，呈深红色。胰腺表面可见许多皂化点。腹腔积液少，肠系膜和网膜皂化斑明显，胰腺与周围组织粘连严重。

2.2.1.2胰腺系数的变化

实验结果表明，模型组小鼠胰腺系数显著增加，与正常组相比有显著性差异(n = 8，p

第二章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用

2.1材料和方法

2.2结果

2.3小结

第三章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用

3.1材料和方法

3.2结果

3.3小结

第四章青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的分子机制研究

4.1材料和方法

4.2结果

4.3小结

全文讨论

一.急性胰腺炎和败血症

急性胰腺炎是一种常见的临床疾病，发病率高，发病急，发展迅速复杂。它不仅局限于胰腺及其周围组织的局部炎症反应，还表现出低血压、器官灌注不足、成人呼吸窘迫综合征、多器官衰竭综合征等症状。直到死亡[13]。换句话说，急性胰腺炎可以从胰腺组织的最初局部病变迅速发展为全身炎症反应综合征、败血症、脓毒性休克，甚至多器官衰竭，甚至死亡。全身炎症反应综合征(SIRS)是由胰腺无菌性坏死和胰腺炎早期胰酶激活引起的持续全身炎症反应的复杂过程。胰腺释放的内容物刺激身体产生大量炎症介质和细胞因子，最终导致全身组织和器官功能异常[14]。目前，感染和全身炎症反应综合征被认为是影响SAP [15发生、发展和结果的关键环节。在大多数情况下，急性胰腺炎是轻而易举的，但局部和/或全身并发症仍可导致高达25%的重症急性胰腺炎。50%的重症急性胰腺炎患者出现全身炎症反应综合征，而20-30%的重症急性胰腺炎患者死于多器官功能障碍综合征。因此，深入了解重症胰腺炎脓毒症的发病机制，研究新的有效药物，对重症胰腺炎早期有效的临床干预有很大的帮助。

急性胰腺炎是由多种原因引起的全身炎症反应综合征。脓毒症是由感染性因素引起的全身炎症反应综合征，也称为全身炎症反应综合征亚型。由于全身炎症反应综合征贯穿急性胰腺炎的病理生理过程，如果早期全身炎症反应综合征得不到有效控制，脓毒症和脓毒性休克将发生在晚期，多器官衰竭的风险将大大增加，病死率也将增加4-5倍。因此，急性胰腺炎的本质是全身炎症反应综合征和脓毒症。

全文摘要

一、青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用

1.成功建立了天蓝蛋白联合脂多糖诱导的小鼠急性胰腺炎模型。

2.青蒿琥酯治疗后，急性胰腺炎小鼠胰腺组织病理改变明显改善，血清中AMS、胰蛋白酶、脂肪酶和丙二醛含量显著降低，胰腺超氧化物歧化酶活性显著提高。

二.青蒿琥酯对重症急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用

1.通过胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠成功建立大鼠重症急性胰腺炎模型。

2.青蒿琥酯的治疗显著改善了重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织的病理变化。血清中AMS、胰脂肪酶和丙二醛含量显著降低，胰腺超氧化物歧化酶活性显著提高，白细胞介素-6也显著降低。

三、青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的分子机制

1.将胶原酶逆行注射入胆胰管成功分离大鼠胰腺腺泡细胞。

2.青蒿琥酯干扰脂多糖刺激的腺泡细胞。酶联免疫吸附试验和逆转录聚合酶链反应试验表明青蒿琥酯能抑制胰腺腺泡细胞白细胞介素6和白细胞介素1β的释放，降低白细胞介素6、白细胞介素1β、TLR2、TLR4和p65的基因表达。

3.青蒿琥酯可抑制TLRs/NF-κB途径的激活，抑制相关重要分子的表达，减少促炎因子的产生，并发挥抗炎作用。