24521字硕士毕业论文糖尿病的临床观察及基因缺失

论文类型：硕士毕业论文

论文字数：24521字

论点：引物,营养不良,基因

论文概述：

本实验采用对引物方法,对38例DMD病人进行基因缺失检测,检出基因缺失者18例,缺失率为47.4%,1国际多中心组用9对引物PcR方法对754例DMn旧MD进行检测,阳性率为46.0%

论文正文：

前言

杜亨内型进行性肌营养不良症(Duehennemuseulardystrophy DMD)是由肌肉营养不良蛋白缺失或功能障碍引起的脏肉系统遗传性疾病中较为常见的一种X连锁隐性遗传病。目前尚无治愈方法，只能采用对症支持疗法，只能缓解病情发展，改善临床症状。在分子遗传学兴起之前，糖尿病的诊断主要依靠典型的临床症状、体征、生化检查、肌电图、肌肉活检等进行初步诊断。近年来，随着分子生物学的快速发展，基因重组技术在糖尿病研究中取得了很大进展，使糖尿病的基因诊断成为现实。通过对38例糖尿病患者的临床观察和外显子9缺失的检测，了解了该地区糖尿病患者的临床资料、基因缺失类型和分布，为今后的进一步研究、携带和产前诊断奠定了基础。

材料和方法

一、案件来源。病例为广西医科大学第一附属医院的儿科病房和门诊患者(均为广西患者)，其中有五对兄弟姐妹。

二.临床检查:除常规病史采集和体检外，所有患者应特别注意家族史、发病时间、治疗时间和主要临床症状(包括鸭子步态、上楼困难、走路晚、上肢无力和智力低下)的存在。主要临床体征(包括肌肉萎缩、健康反射减少或消失、肠道引流肌肥大、翼状肩、高尔氏综合征、膜挛缩、关节畸形)生化检查和肌肉活检病理检查:血清检测L磷酸肌酸激酶(LD功、肌酸激酶同功酶(CpK)氢化酶(酵素(Go advice，a-HBDH)及其母磷酸肌酸激酶(CPK)；所有患者均接受肠道引流活检病理检查。基因缺失的聚合酶链反应检测；

1.从静脉血中提取基因组脱氧核糖核酸:将患者的静脉血Zd收集在0.5%乙二胺四乙酸抗凝剂、3%明胶生理盐水sd的10毫升玻璃管中，混合均匀，然后静置10分钟，取上清液离心分离白细胞。ZML1 SMMTES (1 SRRNO优于Tris-HCl PHS.0，15 NNOL乙二胺四乙酸，15 ~ 0氯化钠)溶解白细胞，加入10%十二烷基硫酸钠至最终浓度为0.5%，混合均匀后加入2ml ZnFilts饱和苯酚，用吸管轻轻上下吸混水和苯酚相，350台伪氮离心机10分钟，吸出脱氧核糖核酸上清液，放入另一试管。重复苯酚提取步骤一次。加入等体积的氯仿/异戊醇(24/1，V刀铲)提取一次，方法类似苯酚提取。将含有脱氧核糖核酸的上清液转移到试管中，缓慢加入2.5倍体积的冷乙醇，并连续摇动上清液以分离出脱氧核糖核酸。用TE缓冲液溶解脱氧核糖核酸，或添加

保存75%的乙醇供以后使用。

2.引物设计与合成:引物的碱基序列来自Chan，他选择了erlain等在DMD基因的两个缺失热点中容易被删除的9个外显子的侧翼序列。作为聚合酶链反应扩增的引物。图1说明了基因中9对引物的相对位置。表1列出了每对引物的核苷酸序列和扩增的脱氧核糖核酸片段的长度。引物由中国医学科学院生物工程研究所合成。

3.聚合酶链反应扩增:每对缓冲液2微升，蒸馏水16微升，NTP 2。硫和0.25微克的脱氧核糖核酸样品在反应系统中反应。将上述液体混合均匀并离心后，加入一滴石蜡油防止挥发，并在94℃预变性10天

几分钟后，加入T，称脱氧核糖核酸聚合酶(华美生物工程公司)为1.0u，最终反应体系为25ul，然后在94℃变性30秒，在56℃退火1分钟，73分钟。c .延长1分钟，共30个循环。最后一次延长10分钟。电泳及结果鉴定:取扩增产物sul，进行2%琼脂凝胶电泳，电子束染色，在紫外灯下观察结果。图2、3、4、5和6是正常人和一些患者扩增产物电泳后在紫外线灯下观察到的结果。

一、中文摘要1

英文摘要2

导言3

四.材料和方法4

V.结果8

Vi .讨论14

讨论

杜氏进行性肌营养不良症(DMD)是最常见的X连锁隐性致命疾病，由肌营养不良蛋白的缺失或功能障碍引起。主要表现为运动障碍、肌肉萎缩和肌无力引起的身体畸形以及进行性发育。男性婴儿DMD的发病率高达l/3500活产儿。它通常发生在5-6岁之前。起初，DMD经常表现为双下肢无力，走路摇摆(鸭步态)，容易摔倒在平地上，逐渐发展成站立困难，不能平稳地跑、跳、爬楼梯，在9-12岁左右经常丧失行走能力。大多数患病的儿童最终会躺在床上，遭受痉挛、挛缩、褥疮和肺炎之苦，并在20岁时死亡。目前，还没有有效的治疗糖尿病的方法。因此，建立简单、准确的基因携带者检测方法和产前诊断是预防和降低糖尿病发病率的关键。在分子遗传学兴起之前，糖尿病的诊断主要依靠典型的临床症状、体征、生化检查、肌电图、肌肉活检等进行初步诊断。肌萎缩蛋白分子量为427KD，分布在正常骨骼肌和心肌细胞的细胞质中。它主要聚集Z带，终板区的氧密度更大。生物功能萎缩蛋白-糖蛋白复合体DGC)是相关的。DGC是肌下膜骨架和细胞外基质之间的跨膜桥梁，是横肌中唯一支持肌浆膜结构的结构。DGC也可能与细胞生物学功能有关，如信息传递和细胞内钙离子浓度的调节。当dys+hin基因突变发生时，DGc功能丧失，细胞骨架与细胞外的连接断裂，肌膜的稳定性降低或消失，最后细胞死亡t31。肌肉酶从细胞中溢出，使肌肉组织中存在的酶首先出现在血清中。血清肌酸磷酸激酶(CPK)等酶活性不仅在患者血清中明显增加，有时在杂合子(60%)携带者甚至胎儿羊水中也明显增加，因此是可用的。

参考

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