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不同液体对新鲜病理标本的保存效果对比

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85%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、二甲苯、石蜡 烘箱温度主要能够熔化石蜡。 大约65度 对于每种液体20-30分钟，你也可以在酒精后加入1-2步丙酮！

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不同液体对新鲜病理标本的保存效果对比范文

我院是一所二本综合性学院，每年需要购买甲醛液 30 箱共 40 L; 一所二级甲等县级医院病理科和手术室每年大约需要购买甲醛液体 100 箱共 50 L.甲醛具有一定的致癌性，为预防和控制甲醛所致的职业危害、保护大家赖以生存的环境，找到与其具有相同固定效果的固定液来替代传统的甲醛液是迫在眉睫的事。本研究选择了无醛 GS 固定液、环保型标本保存液和传统甲醛液 3 种液体，观察不同液体对新鲜病理标本固定、组织 HE 染色和细胞免疫组化的效果，并观察 3 种保存液固定由传统甲醛液处理 2 月的病理大体标本，同时用 3 种保存液直接保存新鲜的病理大体标本，1 年时间有何不同效果，探讨无醛 GS 格林固定液和环保型标本保存液取代甲醛固定液的可行性。

1材料和方法

1.1个样本

我院附属医院郴州第四人民医院病理科采集了7份新鲜手术标本，包括乳腺癌、甲状腺肿瘤、急性蜂窝组织炎阑尾炎、结肠癌、子宫腺肌瘤、前列腺肥大和宫颈电切术7种组织。另外，从医院病理科采集24例病理标本，用传统甲醛溶液固定2个月，其中乳腺纤维瘤6例，胃癌6例，淋巴瘤6例，直肠癌6例。

1.2种试剂

张家港华谊科教设备有限公司生产的环保型标本保存液，温州医学院模具预防研究所开发，CJM Y001，专利号:ZL 20071005074.4；无醛固色剂由哈尔滨绿色标本技术开发有限公司生产，生物组织标本制备液专利号为201110023746。0；甲醛试剂由张家港华谊科教设备有限公司生产；HE染色溶液是自制的，组织切片器是德国莱卡2500。癌胚抗原CEA、增殖指数蛋白Ki-67和肌动蛋白即用型单克隆抗体均购自福州美信生物技术发展有限公司

1.3常规染色和免疫组织化学染色

提交了7份新鲜的快速冷冻切片手术标本进行临床检查，包括乳腺癌、甲状腺肿瘤、急性蜂窝组织炎阑尾炎、结肠癌、子宫腺肌瘤、前列腺肥大和宫颈电切术等7种活检组织。

快速冷冻诊断报告发布后，将七种新鲜组织分为三等份三组，即10%甲醛溶液组、环保标本保存液组和无醛固相液组，固定时间为48小时，每组取两片相同的组织， 75%乙醇+4%甲醛溶液ⅰ和ⅱ分别固定2 h，80%乙醇脱水1 h，95%乙醇ⅰ和ⅰ分别固定1 h，95%乙醇ⅱ1 h，无水乙醇1h，无水乙醇ⅱ1h，二甲苯ⅰ透明1。 0 h，二甲苯ⅱ透明1。0 h，浸蜡溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ各1份。0h；常规石蜡包埋切片的HE染色:获得组织材料后，进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘烤、染色、密封等一系列过程；同时，用免疫组织化学染色SP法检测3组21个组织的石蜡，检测癌胚抗原、Ki-67抗原和肌动蛋白，DAB染色，苏木精再染色:石蜡切片脱蜡洗涤，抗原修复，加入过氧化物酶封闭剂，室温孵育10分钟，PBS洗涤3×3分钟，除去PBS，切片加入正常非免疫血清，室温孵育10分钟，除去血清，滴加TMSG-1抗体， 室温孵育60分钟，用水洗涤PBS 3×3分钟，除去PBS，将聚合酶缀合物滴在切片上，室温孵育10分钟，用水洗涤PBS 3×3分钟，除去PBS，显影DAB，最后显影自来水，再染色苏木精，PBS为蓝色，梯度醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶密封。 同时建立阴性对照，用PBS代替一级抗体。结果判断:免疫组织化学和免疫细胞化学阳性判断标准:细胞质或细胞核棕黄色颗粒阳性。在每种情况下随机计数五个高功率场，并根据阳性细胞的数量和染色强度评分:阳性细胞≤10%，阳性细胞> 10%且≤25%的为0，阳性细胞> 25%且≤50%的为2，阳性细胞> 50%的为3。根据着色强度得分:0表示不着色，1表示浅色，2表示黄色，3表示棕色和黄色。当两者的综合得分≥2时，发现阳性表达。观察三组新鲜大体标本处理48 h后he切片效果与组织抗原性保存的异同。

1.4个样品储存在3种固定剂中

从该材料中获得的三组新鲜组织仍保存在原来的液体组中，每个标本展示筒的液面比标本高3-5厘米，沿标本筒口周边注入一层氯仿密封缸盖，注明保存标本的液体名称和制作时间，过程中不加液体，时间为1年。此外，收集了我院病理科24例活检标本，其中乳腺纤维瘤6例，胃癌6例，淋巴瘤6例，直肠癌6例。常规石蜡切片诊断报告后，样品仍用10%甲醛溶液处理2个月，甲醛溶液用纯净水洗涤至干燥(保存液因沉淀在自来水中而不透明)。标本分为3组。将样品分别放置在无醛固相液体样品展示筒、环保样品储存液体样品展示筒和传统10%甲醛液体样品展示筒中一年，观察3种固相液体对7份新鲜样品和24份传统甲醛处理样品的不同固定效果。

2结果

2.1氦染色

用无醛固色剂制备的组织蜡块，感觉切片中的组织软硬适中，特别是在子宫肌瘤组织的治疗中，无硬现象，切片厚度均匀，连续性好，常规he染色组织结构清晰，细胞形态完整，核质比清晰，与传统固色剂相比，无醛固色剂在保持组织形态方面无明显差异，颜色比例合适(图1A-B)。然而，环保标本保存液处理组织后染色效果差，染色细胞膜边界不清，细胞质和细胞核染色不太亮，组织显得松散(图1C)。

2.2免疫表型

用无醛固色剂处理标本制备的组织石蜡切片显示，胞浆内抗原性保存良好，阳性结果定位准确，背景清晰，与免疫组化SP法传统组织染色结果无明显差异。组织固定48 h的免疫组织化学效应与细胞质染色一致(图2A-B)。细胞核染色(图2D-东)。然而，在用环境友好的标本保存液处理的标本的组织免疫组织化学SP方法中，癌胚抗原、CK7和肌动蛋白的表达很差(图2C和F)。标本的细胞质或细胞核染色，结果细胞质染色颜色浅，不符合阳性标准，细胞核染色阴性。

2.3 3 3种固定方法对大体标本1年效果的比较

一年后，当盖子打开检查时，三种液体的数量和颜色质量都下降了:显示样品筒中的液位下降，环保样品储存液、无醛固色液和10%甲醛液的液位下降了2。1厘米，1。1cm和1。分别为2厘米。对于新鲜标本的环保标本保存液组，液体混浊并开始变黄，标本柔软性明显，无醛固液组的新鲜标本液体清澈透明，而10%甲醛液组的颜色质量纯净不变(表1)。

用10%甲醛溶液固定2个月后，将样品放入3种液体显示样品罐中。一年后，标本被打开检查。环保标本保存液组为浅棕色透明液体，标本正常，无霉变，质地中等，无醛固色液组为浅黄色透明液体，10%甲醛溶液组颜色和质量无变化(表1)。

3讨论

随着分子生物学的快速发展和医学实验室环境评价标准的逐步提高，使用环境友好试剂和建立“绿色”实验室已成为大势所趋。多年来病理学家也一直希望开发和替换有害试剂，如甲醛。在国外发达国家，环保型固定剂已被推广应用，取代甲醛固定剂[2]。在我国，环保固色剂尚未得到广泛应用。目前，大多数病理部门在日常工作中仍然使用甲醛作为固定剂，[3-7]。研究结果表明，无醛固色剂能更好地保存组织细胞的形态和结构，用其制备的各种病理组织切片he染色效果良好，制备的切片满足病理诊断的要求。用无醛固色剂固定不同组织的免疫组织化学染色结果表明，组织细胞中抗原成分保存良好，阳性定位准确，背景清晰，效果与常规甲醛固定石蜡切片基本相同。无醛固定剂和常规的10%中性甲醛固定剂在he染色和免疫组织化学染色病理科的常规工作中具有相同的效果，可以替代甲醛成为医院病理科和医学院的常规固定剂。

本实验评价了环保型标本保存液固定组织的效果。结果表明，环保型标本保存液的挥发量大于福尔马林，更换周期较短。样品液表面在一年内易发生霉斑变化。钢瓶内的液体不透明，乳白色，发霉混浊，能见度差。与传统保存液甲醛溶液相比，常规染色采用组织固定，组织疏松，细胞核胞浆染色不亮，组织免疫组织化学染色效果不好。然而，无醛固色剂是4。5升/桶，大约0元人民币。300万桶。我校医学院校实验室每年消耗约40 L固定剂，支出高达12万。郴州市第四人民医院的固定液为每年50 L，费用为15万。与传统方法相比，试剂价格相对较高，难以推广。因此，与此同时，我们选择了一种比无醛固色剂更便宜、无毒的环保型标本保存液。环保型标本保存液的主要成分是壳聚糖、二乙酸酯、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠和甘油。该保存液安全无毒，无刺激性气味，无腐蚀性，吸水保湿[8】。

综上所述，无醛固色剂能很好地保持组织细胞的形态结构。用无醛固色剂制备的组织切片对各种病理标本的HE染色结果良好。在相同免疫组织化学条件下，同一标本的免疫组织化学染色结果与常规甲醛固定法制备的抗体表达阳性率和阳性程度基本一致。它可以代替传统甲醛作为医学院校和医院病理研究所以及[9-12病理科的常规组织固定溶液。本发明不适合标本的长期保存和标本组织病理切片的固定。然而，病理标本用10%甲醛溶液处理2个月后，再放入环保标本保存液中保存1年，标本外观和颜色正常，组织质地中等，弹性和韧性好，保存液仍清晰透明，无混浊，表面无霉变，标本陈列室空相当无味。在将标本放入保存液之前，标本应使用甲醛溶液固定。这样，环保标本保存液也可以代替甲醛溶液保存标本，用于医学院校制作病理大体标本。本发明具有安全无毒、价格低廉等优点，易于推广使用。GS无醛固定液和新型无味标本保存液不含任何挥发性有毒有害物质，能有效消除甲醛强烈的刺激性气味，避免甲醛的毒性作用，改善科研人员的工作环境，从根本上解决甲醛对人体的危害和环境污染问题，也能满足教学和科研的需要。

参考:

[1]科格里阿诺·VJ，格罗斯·Y，巴恩·拉，等.会议报告:IARC关于甲醛、2 -丁氧基乙醇和1-叔丁氧基-2-丙醇的专著之和[.环境健康展望，2005，113( 9) : 1205-1208。

[2]琼斯毫升。福尔马林如何影响常规和特殊染色的结果[。生物技术组织化学，2007，82 ( 3 ) : 155 -159。

[3]莫里斯·CB，特·霍芙·恩，范京克尔·JW，等.甲醛替代物fixalives。宏观分析、形态学分析和免疫组织化学分析[。《临床病理学》，2011，136( 4) : 548-556。

[4]伊苏鲁姆，巴尔比，瓦萨阿波罗，等.法医病理学中的微波处理和乙醇固定.《医学病理学》，2006，27( 127) : 178-182。

[5]阿克顿·阿，哈维·泰，成长·兆瓦。非洲爪蟾胚胎非形式固定方法的研究[[]。DevDyn，2005，233( 147) : 1464-1469。