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脑组织冰冻切片与石蜡切片免疫组化对比,石蜡切片或冷冻切片用于组织免疫荧光吗

脑组织冰冻切片与石蜡切片免疫组化对比

根据自身的实验条件和抗体的性质,可以使用石蜡切片或冰冻切片进行组织免疫荧光。根据您的实验要求,冷冻切片需要更高的要求(低温环境、液氮、冷冻切片器、OCT包埋剂等)。),石蜡切片制造更简单,试剂更便宜。此外,这取决于您购买的抗体适用于哪种薄膜免疫组。

免疫组化用冰冻切片好还是石蜡切片好

简而言之,石蜡切片是需要固定、脱水并浸泡在蜡中才能用于切片的标本。冷冻切片是将样品直接放在切片机上立即冷冻,然后切片的切片。简而言之,切片需要许多程序。一个直接用于切片。免疫组织化学冷冻切片用于破膜。所有实验都在步骤1中进行。新鲜组织用4%多聚甲醛固定24小时,用20%蔗糖脱水4~8μm以上,包埋在3 ~ 250℃的冷冻切片机中。4.冷冻切片嵌入冷冻切片中。冷冻切片免疫组织化学染色:冷冻切片为4-8微米,室温放置30分钟,然后用丙酮和石蜡固定。冷冻会破坏你的健康。通常需要免疫组织化学 Oct包埋、切片、冷丙酮固定、免疫组织化学染色按常规程序进行(脱水后,过氧化氢时间视情况而定

石蜡切片或冷冻切片用于组织免疫荧光吗

根据自身的实验条件和抗体的性质,可以使用石蜡切片或冰冻切片进行组织免疫荧光。根据您的实验要求,冷冻切片需要更高的要求(低温环境、液氮、冷冻切片器、OCT包埋剂等)。),石蜡切片制造更简单,试剂更便宜。此外,这取决于您购买的抗体适用于哪种薄膜免疫组。

免疫组化用冰冻切片好还是石蜡切片好

脑组织冰冻切片与石蜡切片免疫组化对比范文

随着神经科学的不断发展,脑组织免疫组织化学技术越来越多地应用于神经学研究。由于脑组织本身具有柔软性和高含水量的特点,石蜡切片免疫组织化学染色结果容易出现切片染色不清晰、剥落、假阳性、假阴性等问题。[1],并且很难获得脑组织的高质量免疫组织化学切片。本实验采用癫痫持续状态模型,采用免疫组化方法检测海马下齿状回微管相关蛋白(DCX)阳性神经元的表达,并比较脑组织冰冻切片漂浮贴片法和石蜡切片贴片法的免疫组化效果,以更好地开展实验研究工作。

1物体和方法

1.1对象

湖北实验动物研究中心提供体重(30±5)g的健康雄性昆明小鼠20只。东莨菪碱和毛果芸香碱由西格玛公司提供。免疫组织化学试剂盒、DCX羊抗小鼠一级抗体、驴血清和驴抗羊二级抗体由圣克鲁泽公司提供。

1.2方法

1)腹腔注射东莨菪碱1毫克/公斤,30分钟后腹腔注射毛果芸香碱280毫克/公斤,观察小鼠的一般行为变化。根据拉辛的6级惊厥行为评估,表现为ⅳ-ⅴ级癫痫,癫痫状态持续至少60分钟以上,这意味着SE模型已成功制备[4]。0级:无癫痫症状;一级:头部和面部抽搐;二级:有节奏的点头或湿狗样的颤抖;三级:双侧前肢痉挛,无后肢站立;四级:全身强直阵挛性发作,后腿站立不倒;ⅴ级:全身强直阵挛性发作,后肢站立伴跌倒。

2)麻醉24小时后,成功制作小鼠模型并分组。开胸手术从左心室插管到升主动脉。右心房附件被切开。首先快速注入生理盐水。生理盐水灌注液流出澄清后,用0.1M PBS制备的200 ~ 250毫升4%多聚甲醛代替三通管。滴注约1 ~ 1.5h,待小鼠全身僵硬后,断头取脑。随机选择8只大鼠,分为两组:A组采用冰冻切片免疫组化法,B组采用石蜡切片免疫组化法(4只大鼠死亡,弃用)。

(3)免疫组织化学a组冰冻切片免疫组织化学浮片法:将后脑置于4%多聚甲醛中,4℃固定8 ~ 10小时,然后将脑组织转移到0.1MPB配制的30%蔗糖溶液中,4℃放置,待脑沉到底后取出,在视神经交叉根和四倍体之间切开3 ~ 4毫米的脑组织,包括海马层,用光学相干断层扫描包埋液氮快速冷冻,切片厚度约40 μ m .

逐一切片后,依次放入0.1MPB的24孔板中。用0.01M柠檬酸缓冲液微波修复后,用SABC法进行免疫组织化学染色。

乙组石蜡切片免疫组织化学贴片法:取后脑置于4%多聚甲醛室温下固定24小时后,常规石蜡脱水、包埋、切片,用约4μ m.0.01M的柠檬酸缓冲液微波修复,采用SABC法进行免疫组织化学染色。

1.3统计分析

从每个脑组织切片中随机选择五个视野。免疫组化切片在光学显微镜下(×400)用ImagePro Plus6.0医学图像分析系统进行分析。半定量分析海马齿状回颗粒下区DCX阳性神经元的数量。获得的数据用(X-hat)表示,用方差分析和软件进行T检验。

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