28364字硕士毕业论文锰对体外培养睾丸支持细胞的影响及其对男性生殖损伤的机制。

论文类型：硕士毕业论文

论文字数：28364字

论点：细胞,睾丸,雄性

论文概述：

本研究选取健康雄性20天龄SD大鼠睾丸,分离纯化Sertoli细胞并鉴定。培养第六天给以MnCl_2染毒,对照组给以同体积的DMEM培养液,24小时收集细胞，研究锰对体外培养Sertoli细胞的影响,探讨锰引起雄性

论文正文：

前言:本研究选择健康雄性20日龄SD大鼠睾丸，分离纯化并鉴定支持细胞。培养第6天二氯化锰中毒，对照组给予相同体积的DMEM培养液。收集细胞24小时，研究锰对体外培养的支持细胞的影响，探讨锰诱导雄性生殖损伤的机制。由本网站的硕士论文中心组织。

前言

锰是一种常见的金属毒物，它在体内的过量积累会导致中毒反应。近年来，随着现代工业的发展，锰的生产和消费日益增加。越来越多的三磺酰基甲基环戊二烯基锰(枷T)被用来代替铅作为汽油的防爆剂。杀菌剂的应用和临床磁共振检查也使用锰替代仪式作为组织特异性[2]。大量接触锰的职业工人、动物实验和体外细胞培养研究表明，锰对神经系统的毒性作用已经得到证实。

锰对许多雄性动物的生殖系统有不良影响，可导致翠丸萎缩、精子数量减少、活性精子率降低、高丸和高福器官系数降低，最终导致生精功能障碍等一系列生殖毒性。一些数据表明，与其他器官相比，翠丸对锰有极高的敏感性。氯化锰能通过血绿色屏障，损害生精功能，抑制生精L0。翠湾锰含量与精子数量、精子畸形率和精子活力呈负相关，但其确切的分子机制尚不清楚。尚未发现锰对体外支持细胞的影响。

支持细胞(Sertoli cells)是翠湾生精上皮中唯一的非生殖细胞，在生精细胞中起支持和滋养作用。支持细胞在生精小管上皮细胞上分层排列，形成血细胞屏障[\"，，，4]。塞尔托细胞能分泌多种物质，包括转铁蛋白、雄激素结合蛋白、苗勒管抑制剂等。塞尔托细胞(SerToh cells)是为生精细胞创造适宜环境，保证生精细胞增殖、分裂和成熟的主要细胞。支持细胞产生的抗穆勒管激素在胚胎期男性生殖发育中起着重要作用。MIS能降解穆勒氏管，从而使胚胎发育成雄性个体[l7，l”1。一些研究表明，青春期早期的男性崔婉体内Mls与古酮呈负相关。体内和体外实验已经证实支持细胞是翠湾唯一合成抗体的细胞。ABP也是支持细胞的功能性标志蛋白，它与睾丸间质细胞分泌的雄激素结合，并将其转运至生殖道。高酮是形成男性第二性征、维持男性性功能和精子发生的基础。ABP与Cui酮结合后，Cui酮被转运到生精小管，使生精小管中Cui酮浓度更高，为生精细胞的发育成熟提供了良好的内部环境。ABP作为支持细胞的一种特异性生物标志物，已经引起了许多学者的关注，并经常被用来研究支持细胞的功能指数1201。翠丸的功能由两种促性腺激素调节:卵泡刺激素和黄体生成素。卵泡刺激素被认为在精子发生的启动中起重要作用，卵泡刺激素通过作用于骨湾支持细胞的卵泡刺激素11价而发挥作用。FSHR位于支持细胞的细胞膜上，属于G蛋白偶联受体超家族的糖蛋白亚家族成员。它的胞外结构域具有卵泡刺激素特异性结合位点。卵泡刺激素和FSHR结合后，支持细胞内cAMP增加。因此，蛋白激酶A被激活。活化的蛋白激酶进入细胞核，磷酸化某些调节因子。磷酸化的转录因子与特定的基因调控位点结合，导致一系列蛋白酶和转录因子的激活，从而在促进ABP合成中发挥作用。卵泡刺激素结合FSHR还能刺激支持细胞分泌抑制素B，抑制垂体分泌卵泡刺激素，从而使身体处于负反馈的生理平衡中。FsHR基因的表达具有很高的细胞特异性。实验证明，1231年古湾只有塞尔托细胞表达FSHR。陈雪岩等人[24]也通过原位杂交实验证实了FSHR仅位于支持细胞中。因此，研究ABP和FSHR在支持细胞中的表达可以客观地反映支持细胞的活性和功能。

我们假设大剂量锰可能对古丸的支持细胞有毒性作用，影响支持细胞的功能，从而影响生殖功能。鉴于微量元素、抗体和FSHR与睾丸支持细胞功能之间的密切关系，本实验以体外培养的睾丸支持细胞为研究对象，观察不同浓度锰作用下微量元素、抗体和FSHR的变化，探讨锰对男性生殖功能的作用机制。
材料和方法
1实验材料和仪器

1细胞实验动物
20日龄清洁雄性SD大鼠，体重45-509，由重庆第三军医大学实验动物中心提供。证书没有。:0052977等。

2实验方法

2.1支持细胞的原代培养
2.1.1支持细胞的原代分离和培养方法
参照文献[25l对该方法稍加修改，具体操作如下:
(1)清洁级雄性SD大鼠20日龄，采用颈椎脱位法处死。
(2)将鼠体用75%乙醇浸泡Zmin，然后放入超净台预先准备好的培养皿中，用碘伏再次消毒腹部皮肤，用中剪切断腹部皮肤，用眼剪从下腹部翠绿色部分切断精索，取出双侧攀缘丸，将精索放入装有预冷的D-Hanks溶液的培养皿中。
(3)预冷却的d-汉克斯溶液洗涤两次，以修剪附在赵氏丸上的精索。撕下薄膜，放入小烧杯中，用丁汉克斯溶液清洗3次。
(4)眼科剪刀将塞丸的物质切成约1~，片，用预冷的天葵溶液清洗一次，静置3 ~ 4分钟。转移至50毫升锥形瓶。吸取上层d-Hanks，在37℃下向每只大鼠加入3毫升胰蛋白酶和0.25%。[/溴/] (5)在37℃下高速振荡消化15-20分钟，直到剩余基质被消化成粘稠液体，可见碎片状生精小管，此时间质细胞(leydig cells)和其他细胞如管周平滑肌样细胞(myoideell)解离。

参考:

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目录:
1锰支持细胞体外毒性研究4-37
1.1中英文缩写对照表4-6
1.2中文摘要6-7
1.3英文摘要7
1.4前言8-10
1.5材料和方法10-19
1.6结果19-28
1.7讨论28-32......
2睾丸支持细胞功能及研究进展(综述)37-51
3谢谢51帕金森JR，乔德里OB，郭亚特，等.通过锰增强磁共振成像(MEMRI)检测小鼠外周注射GLP-1、氧囊调节素和氯化锂后脑干和下丘脑神经元激活的不同模式。神经影像，2009，44 (3) :1022-1031。

您可能有购买医学学术论文的需求，请到医学学术论文频道选择:图拉西·彭那帕卡姆，凯伦·贝利，凯伦·格雷夫斯，马库斯·伊斯贾德。口服锰暴露后cd1小鼠雄性生殖系统的评估。生殖毒理学，2003年，第17卷(第5期):第547-551页。

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